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| 测定开光复明丸中黄芩苷的含量实验 | |||
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1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪;VWD紫外检测器;AX205梅特勒-托利多电子分析天平;KQ-300VDB超声波清洗器。
1.2 试药 甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸(分析纯)(为北京化工厂生产)。黄芩苷对照品(批号110715-200514，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)。开光复明丸三批(批号6013864;6013865;6013866)，中国北京同仁堂(集团)有限责任公司北京中药二厂。
2 实验方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液 精密称取黄芩苷对照品10.06mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含黄芩苷0.04024mg)。
2.1.2 供试品溶液 取重量差异项下的本品，剪碎，取约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加入70%乙醇适量，密塞，超声处理(功率300W，频率40kHz)30min，放冷至室温，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2ml，置10ml量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，即得。
2.1.3 阴性样品溶液 按处方比例，取不含黄芩成分的阴性制剂，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.2 色谱条件[2] 色谱柱：ZORBAX SB-C18 (250mm×4.6mm，5μm)分析柱;流动相：甲醇-水-磷酸(50：50：0.2);检测波长：277nm;流速1.0ml/min;柱温：40℃。分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液(批号：6013864)、阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得的分离色谱图如图1显示。结果表明，黄芩苷与其他成分分离良好，不干扰测定，测得理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2500，黄芩苷峰与相邻峰的分离度大于1.5，符合要求。
1.黄芩苷
图1 HPLC色谱图2.3 线性关系 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含0.2012mg溶液，作为储备液。分别精密量取对照品储备溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置于10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按正文所述色谱条件测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行回归处理。得黄芩苷回归方程：Y=29.59708249X-69.11618323, r=0.9991 ,n=6，表明黄芩苷在0.1005~0.8048μg范围内有良好的线性关系。
2.4 回收率试验 称取已知含量的同一批样品(批号6013864，含量为3.927mg/g)约0.3g(6份)，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.04312mg/ml)各25ml，按供试品溶液制备及上述色谱条件操作，依法制备、进样、记录色谱图、计算回收率，结果见表1。表1 开光复明丸中黄芩苷加样回收测定结果
2.5 稳定性试验 精密称取供试品(批号6013864)0.5060g ，照正文所述方法制备供试品溶液，照上述色谱条件，分别在0、1、4、9、20、24h依法测定，记录峰面积，结果峰面积的RSD%=1.2%(n=6)。表明在24h内基本稳定，本方法有良好的稳定性。
2.6 精密度试验 取供试品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，峰面积的RSD%=2.59%(n=6)。
2.7 供试品含量测定 精密吸取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中黄芩苷的含量，共测定3批供试品。结果见表2。表2 供试品含量测定结果www.atcc360.com
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