卡介苗（BCG）DNA 国家参考品
National reference for BCG DNA
【批号】230024-200901
【性状】冻干粉
【用途】本参考品从我国卡介苗生产用工作种子批上海株 D2-甲 12
（2）培养的菌体中提取，经多重聚合酶链反应（mPCR）检测卡介菌
特异性缺失区 RD1，鉴定为卡介菌 DNA，并经国内有关单位复核验证。
供卡介菌菌株、卡介菌核酸类制品鉴别实验用定性参考品。
【包装】安瓿瓶
【规格】3 μg/支
【使用方法和要求】
1、使用方法
取本参考品 1 支，加入灭菌超纯水 200 μL 复溶，静置 2-3 min
待用。
采用 ET1（5'-AAGCGGTTGCCGCCGACCGACC-3'）、ET2
（5'-CTGGCTATATTCCTGGGCCCGG-3'）、ET3
（5'-GAGGCGATCTGGCGGTTTGGGG-3'）三条引物，分别以灭菌超纯水稀
释至终浓度为 10 μM。取参考品溶液 5 μL，加至 45 μL 反应试剂
中【10 倍 PCR 缓冲液（pH8.3 100 mM Tris-HCl，500 mM KCl，15 mM
MgCl2）5 μL、dNTP Mixture 2 μL、5 U/μL Taq 酶 0.3 μL、2 μL引物 ET1、4 μL 引物 ET2、2 μL 引物 ET3，灭菌超纯水 29.7 μL】，
共 50 μL 反应体系。
反应体系于 94℃预变性 10 min，然后 94℃变性 1 min、64℃退
火 1 min、72℃延伸 30 s，循环 30 次后，72℃再延伸 7 min。取 PCR
产物 10 μL 加 6 倍上样缓冲液（配方：1、吸取 2 mL EDTA（500 mM
pH 8.0）加入约 40 mL 双蒸水；2、再称量 250 mg 溴酚蓝；3、量取
50 mL 丙三醇；4、定容至 100 mL，4 度保存）2 μL 混匀，上样于
3%的琼脂糖凝胶泳道，分子量标记物（50 bp DNA ladder ）直接上
样 6 μL。于 100 mA 电泳 50 min。根据凝胶成像结果，以 50 bp DNA
ladder 为分子量标记，观察参考品 PCR 扩增片段分子量大小。
2、判定标准
参考品扩增片段为约 200 bp（测序为 193 bp）的核酸片段，供
试品与参考品的扩增条带长度一致。结果判断模式图如下