阪崎肠杆菌ITS序列检测质粒DNA标准物质
【编号】:GBW(E)100307 【产品名称】:阪崎肠杆菌ITS序列检测质粒DNA标准物质 【规格】:1.5mL;75.1 ng/μL( 2.19×1010copies/μL) 【用途】: 阪崎肠杆菌ITS序列检测质粒DNA标准物质
编号: GBW(E)100307
规格: 1.5mL离心管
标准值:75.1 ng/μL( 2.19×1010copies/μL)
不确定度: Urel=2.8%(k=2)
本标准物质中质粒DNA采用紫外分光光度法(UV)和高分辨电感耦合等离子体质谱法(HR-ICP-MS)进行定值。
样品制备
在GenBank中搜索阪崎肠杆菌的16S~23S rDNA 间区(ITS)序列;对上述序列进行分析,选择合适的序列和合适的酶切位点,并将酶切位点加至序列两端;将处理后的序列进行全基因人工合成,并将所得全长基因克隆至质粒载体pUC19中,构建获得包含目的基因序列的质粒DNA标准物质。利用大肠杆菌DH5α进行复制生产,对目标质粒DNA进行提取纯化,经稀释分装得到质粒DNA样品。
溯源性及定值方法
本标准物质中质粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨电感耦合等离子体质谱法(HR-ICP-MS)进行定值。
核酸分子含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键,其紫外可见吸收光谱在260 nm附近有一强的吸收峰,针对双链DNA,样品浓度和吸光值之间有以下关系:双链DNA样品浓度= OD260×核酸稀释倍数×50,其中OD260为核酸在260 nm处的吸光值。用超纯水做空白对照,通过测定其在260 nm处的吸光值可换算出质粒浓度。
核酸分子中,每个碱基对应一个磷原子,根据公式:含磷量P%=碱基数*磷的原子量÷DNA分子量,即可计算出四个质粒DNA标准物质的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法检测标准物质样品中的磷元素含量,计算得到质粒DNA标准物质的含量。
定值过程使用满足计量学特性要求的测量方法和计量器具,保证其溯源性。
三、特性量值及不确定度
保质期: 12个月
来源:计量院
类别:国标物、阪崎肠杆菌ompA基因
声明:此对照品、标准品由【中检计量】提供网站查询购买服务
注:点击cas,或者搜索:名称、编号、cas均可显示价格
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