阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质

  【编号】：GBW(E)100305

  【产品名称】：阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质

  【规格】：1.5mL；52.3 ng/μL(1.71×1010copies/μL)

  【用途】：

　　阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质

　　编号: GBW(E)100305

　　规格: 1.5mL离心管

　　标准值：52.3 ng/μL(1.71×1010copies/μL)

　　不确定度:Urel=3.4%(k=2)

　　一、样品制备

　　在GenBank中搜索阪崎肠杆菌的大分子合成操纵子（MMS）基因序列；对上述序列进行分析，选择合适的序列和合适的酶切位点，并将酶切位点加至序列两端；将处理后的序列进行全基因人工合成，并将所得全长基因分别克隆至质粒载体pUC19中，构建获得包含目的基因序列的质粒DNA标准物质。利用大肠杆菌DH5α载体，复制生产，对目标质粒DNA进行提取纯化，经稀释分装得到质粒DNA样品。

　　二、溯源性及定值方法

　　本标准物质中质粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨电感耦合等离子体质谱法（HR-ICP-MS）进行定值。

　　核酸分子含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，其紫外可见吸收光谱在260 nm附近有一强的吸收峰，针对双链DNA，样品浓度和吸光值之间有以下关系：双链DNA样品浓度= OD260×核酸稀释倍数×50，其中OD260为核酸在260 nm处的吸光值。用超纯水做空白对照，通过测定其在260 nm处的吸光值可换算出质粒浓度。

　　核酸分子中，每个碱基对应一个磷原子，根据公式：含磷量P%=碱基数*磷的原子量÷DNA分子量，即可计算出四个质粒DNA标准物质的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法检测标准物质样品中的磷元素含量，计算得到质粒DNA标准物质的含量。

　　定值过程使用满足计量学特性要求的测量方法和计量器具，保证其溯源性。

　　三、特性量值及不确定度

标准物质名称	标准值	相对扩展不确定度
标准物质名称	标准值	（k=2）
阪崎肠杆菌MMS基因检测质粒DNA标准物质	[浓度]	3.40%

　　保质期: 12个月

　　来源：计量院

　　类别：国标物、阪崎肠杆菌MMS基因

　　声明：此对照品、标准品由【中检计量】提供网站查询购买服务

　　注：点击cas，或者搜索：名称、编号、cas均可显示价格

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