如何在平皿中添加酶才能消除抗生素的残留-新闻中心-中国标准品网

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		如何在平皿中添加酶才能消除抗生素的残留

　　个性化服务就是打破传统的被动服务模式，能够充分利用各种资源优势，主动开展以满足客户个性化需求为目的的全方位服务。我们知道对于抗生素企业和部分制剂厂家来说，仅仅按照国标推荐的两种培养基（TSA和SDA）来监测洁净区的微生物是不够全面的，必要时可以加入适宜的中和剂，而中和剂培养基平皿就是根据客户需要定制化的一种产品。

　　目前制药企业环境微生物监测存在两大风险，也是很多企业容易忽视的问题。

　　风险之一就是药物的API对个别微生物有不同程度的抑制或杀灭作用，特别是抗生素生产企业，洁净室内不可避免地混杂着一定量的抗生素粉尘，在环境监控中所使用的培养基平皿，若不能有效消除抗生素粉尘对微生物生存和生长的环境影响因素，洁净区环境监测的结果可能出现“假阴性”的结果。所以要还原出洁净室内微生物的实际状况，务必要消除抗生素对微生物的影响，目前采用的方法是水解取样时落在平皿上的抗生素。如对于β-内酰胺类抗生素，添加β-内酰胺酶（即青霉素酶）；对于头孢类抗生素，则添加头孢菌素酶；对于培南类抗生素则需要添加金属酶等。

　　如何在平皿中添加酶才能消除抗生素的残留，目前主要依据：《中国药典》2015年版三部附录1105表2：“常见干扰物的中和剂或灭活方法”中所对应的中和或灭活方法，然后根据抗生素生产企业的实际情况，收集在其生产环境中抗生素粉尘的量，最后做加酶实验得出最终的加酶量。为了保证加酶的均匀度，如TSA、SDA等必须在液体固化前的最低温度时加入生物酶，而且要持续匀速搅拌，使酶与培养基充分混合均匀，再灌装于空皿内，这就注定了加酶的培养基平皿制作必须是一个工业化的生产过程。当然确认每块平皿中加多少活性单位的酶量，是必须通过验证才可以得出的数据。

　　抗生素水解酶属生物酶，其本质是蛋白质。酶的生物活性与温度密切相关，酶活性最大的温度与人的体温接近，约37℃左右。例如头孢菌素酶的稳定性如下：

　　案例

　　（某生产头孢菌素类药企）

　　评估洁净区环境监测点

　　制药企业在选择洁净区环境监测点应该通过风险评估确定监测点。例如，在灌装抗生素产品过程的无菌灌装针位置，的确是无菌物料暴露的关键区域，但此监测点也有大量抗生素粉尘沉降，所以选择这个点作为关键点监测细菌沉降意义并不大，如有监测需要，可监测霉菌和酵母菌；而选取稍微远离灌装针的位置作为采样点就比较科学，首先沉降的抗生素粉尘浓度稍低，其次这些位置往往极易受到微生物的污染。因此，抗生素生产环境监测点的选择更应该关注的是“风险点”。这一点是有别于非抗生素产品生产时环境监测的。

　　收集洁净区环境中抗生素残留粉尘量

　　企业在根据风险评估后确定的监测点中选取几个风险比较高的位置，在整个生产过程中放置洁净的空皿（先称好空皿质量），并做好标记。生产结束后，称量每个皿的重量，得出每个皿中收集到的药粉量并做好记录。每个品种分别做3次。

　　加酶试验

　　在获取洁净区监测点的抗生素残留量之后，确定加酶的种类和加酶量。根据环境采样点收集到最多残留粉尘量的2-10倍来进行试验，最终得出加酶量。微生物实验室根据抗生素种类确定水解抗生素的酶的种类。根据抗生素含量分别制做不同酶含量的平皿，采用涂布法，做回收率试验，再与不加酶的平皿做对照，最终选择各种实验细菌回收率都合格的平皿加酶量作为这个抗生素监测点的加酶种类和加酶量。例如，车间其中一个点收集到3.8mg/皿，取试管用15ml水将3.8mg粉尘溶解，然后加入酶进行中和，再加入微生物。若微生物促生长试验能够合格，即能测定出需要加多少酶量才能中和。务必注意，选择的测试菌种必须是该抗生素抗菌谱内的敏感菌和环境常见菌。

　　风险之二就是制药企业洁净环境每天都在使用消毒剂，怎样确定残留的消毒剂没有影响微生物的生长，确保洁净区微生物监测结果不出现“假阴性”。所以选择合适的培养基平皿可以最大限度的衡量洁净室表面的微生物水平。通常卵磷脂、吐温-80组合后能够消除季胺类化合物（苯扎溴铵、苯扎氯铵等）消毒剂的影响；卵磷脂、吐温-80和L-组氨酸组合后能够消除醛类（甲醛、戊二铨等）和酚类（苯酚、间苯二酚等）消毒剂的影响；硫代硫酸钠能够消除卤素类消毒剂（碘伏、碘酒等）的影响等。

　　现在，国外制药企业环境微生物监测时，用于洁净室表面取样的大多为卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基（即TSAWLP）。选择这样的培养基就可以有效的降解可能残留在洁净室表面的消毒剂（主要是季胺类化合物消毒剂）残留。但是目前绝大部分制药企业在没有弄清楚洁净室消毒剂的种类和残留量时就盲目采用卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基（即TSAWLP）用来监测洁净室表面微生物水平是不科学的。因为卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基中所含有的卵磷脂+吐温-80是定量的，这就意味着能够降解的消毒剂残留必定也是在一个规定限度以内的。所以在没有确认所使用的季铵盐类消毒剂的残留限度就盲目采用，同样会产生“假阴性”结果。

　　总之，设计一个洁净室的微生物监测方案时，应该考虑上述两大风险，从而可以真实还原制药企业生产环境中可能存在的微生物的真实水平。

　　每个生产企业都是一个个性化的个体，所以作为一个环境监控培养基平皿的生产企业，要使自己的产品体现客户个性，必须了解客户的“个性”。通过对企业生产建设、业务流程等模块的重新思考和设计，以求为客户创造高质量的个性化服务。

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